色譜柱使用壽命大約為1000針,而保護(hù)柱的壽命大約為280針。主要受色譜條件及保存條件影響。表現(xiàn)形式:柱壓升高、柱效降低、峰形拖尾、峰形變寬、保留時(shí)間發(fā)生變化、固定相流失等。
1、色譜條件,有兩種基本情況:
(1)在相同實(shí)驗(yàn)中,以前使用的色譜柱壽命長(zhǎng)很多,這種情況,應(yīng)該檢查一下色譜條件是否保持一致。樣品的組成,樣品中強(qiáng)吸收的污染物會(huì)破壞色譜柱的柱效。或者管路的密封圈是否完好?脫落的密封圈會(huì)堵塞色譜柱過(guò)濾器和填料的頂層,從而影響樣品的分布。如果可以確認(rèn)色譜條件沒(méi)有變化,那么可以推測(cè)是柱床松動(dòng)的原因。在實(shí)驗(yàn)室和運(yùn)輸過(guò)程中色譜柱劇烈的震動(dòng)都會(huì)導(dǎo)致柱床松動(dòng);
(2)在本實(shí)驗(yàn)中用過(guò)的所有的色譜柱在使用相同次數(shù)后全部損壞,最大可能是樣品中的成分吸附在色譜柱的頂端??赡苁窃诹鲃?dòng)相中不溶的沉淀物或者是強(qiáng)吸收的物質(zhì);
(3)采用合適的樣品準(zhǔn)備技術(shù)處理樣品。用和分析柱相似的固相萃取柱進(jìn)行固相萃?。⊿PE);
(4)使用保護(hù)柱。保護(hù)柱是作為犧牲柱裝在色譜柱前使用的,出現(xiàn)問(wèn)題的時(shí)候就會(huì)被替換掉。保護(hù)柱的填料和裝填技術(shù)必須和分析柱一樣;
(5)反沖柱子。反現(xiàn)在的裝填技術(shù)可以使柱子承受反沖,能更好的去除柱頭端的污染物。
2、使用方法不對(duì),按照生產(chǎn)商的說(shuō)明使用柱子的話一般很少發(fā)生
(1)流動(dòng)相pH超出使用范圍,導(dǎo)致的柱子鍵和相水解或基質(zhì)溶解。樣品用強(qiáng)酸或強(qiáng)堿溶解的話也會(huì)發(fā)生;
(2)高溫也會(huì)導(dǎo)致色譜柱損壞,如高溫會(huì)加速鍵合相溶解;
(3)特殊柱子注意事項(xiàng),例如氨基柱可以和醛,酮反應(yīng)。氨基柱在不含緩沖鹽的水溶液中會(huì)顯強(qiáng)堿性,分解部分硅膠;
(4)暴露在錯(cuò)誤溶劑中的柱子也會(huì)發(fā)生坍塌。因?yàn)檫@些柱子是基于非常松散的結(jié)構(gòu)。他們是因顆粒之間的黏著而部分的結(jié)合在一起的。如果置于能破化這種黏著的流動(dòng)相中,柱床很有可能會(huì)坍塌。氰基柱在中性溶液,苯基柱在THF中有時(shí)就會(huì)發(fā)生這種問(wèn)題。這也是不要沖洗柱子的另一個(gè)理由。