穩(wěn)健的分析方法意味著其可以忽略工作和環(huán)境條件改變對(duì)方法的影響。穩(wěn)健性好的雜質(zhì)分析方法可以在不同實(shí)驗(yàn)室間順利轉(zhuǎn)移，分析結(jié)果可以不受操作中的微小變化的影響，且對(duì)技術(shù)、設(shè)備等條件的變化有緩解作用。對(duì)于HPLC分析方法，影響方法轉(zhuǎn)移的最關(guān)鍵因素為色譜柱和色譜儀。

反相高效液相色譜法（RP-HPLC）廣泛應(yīng)用于藥品質(zhì)量的控制，包括鑒別、含量測(cè)定、有關(guān)物質(zhì)檢查等。反相色譜法主要采用C18柱，各國(guó)藥典包括《中國(guó)藥典》、《美國(guó)藥典》（USP）、《歐洲藥典》（EP）等在液相方法的描述中，通常僅給出色譜柱的簡(jiǎn)單信息，如《中國(guó)藥典》中的“用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑”，USP中的“L1填料（octadecylsilanebonded silica gel）”，EP中有時(shí)還給出色譜柱孔徑（pore size），顆粒大小（particle size），比表面積（specific surface area）等信息，但均未對(duì)C18色譜柱的具體品牌，型號(hào)等進(jìn)行規(guī)定和推薦。目前藥典中給出的色譜柱信息對(duì)選擇合適的色譜柱分析樣品沒(méi)有太多幫助。

市場(chǎng)上有600多種不同品牌的C18色譜柱，且不斷有新品牌的色譜柱出現(xiàn)。采用不同品牌，不同型號(hào)的色譜柱分析具體樣品時(shí)，由于色譜柱選擇性的差異，溶質(zhì)的保留值，色譜峰之間的分離度甚至色譜峰順序都可能出現(xiàn)較大的差異。另外，在重復(fù)某一HPLC方法時(shí)，當(dāng)無(wú)法獲得方法中所用色譜柱時(shí)，需要尋求選擇性相似的色譜柱代替。因此采用適宜的方法表征色譜柱的特性是建立穩(wěn)健的藥品標(biāo)準(zhǔn)雜質(zhì)控制分析方法和應(yīng)用該分析方法的關(guān)鍵。

月旭Ultimate^® 系列液相色譜柱對(duì)某藥物的系統(tǒng)適用性溶液分析譜圖

依據(jù)藥物降解反應(yīng)機(jī)理制備混合雜質(zhì)對(duì)照品用于系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，可以有效評(píng)價(jià)色譜體系對(duì)各雜質(zhì)的分離效能，且利用混合對(duì)照品中各雜質(zhì)的色譜保留信息和UV光譜信息，可準(zhǔn)確定位樣品中的主要雜質(zhì)。利用混合雜質(zhì)對(duì)照品得到的系統(tǒng)適用性試驗(yàn)色譜圖，可以方便地確定不同實(shí)驗(yàn)室得到的色譜圖是否具有可比性，并能同時(shí)確認(rèn)方法的精密度、定量限（LOQ）和／或檢測(cè)限（LOD）。

月旭Xtimate^® 系列液相色譜柱對(duì)某藥物的有關(guān)物質(zhì)分析譜圖

藥物雜質(zhì)HPLC分析方法常采用梯度洗脫系統(tǒng)。對(duì)于不同品牌的HPLC儀器，因?qū)崿F(xiàn)梯度洗脫的裝置或原理不同，比例閥與色譜柱進(jìn)口間的體積不同，會(huì)引起梯度滯后的時(shí)間不同，造成儀器間梯度行為有差異。采用動(dòng)態(tài)法表示梯度程序［即以與系統(tǒng)滯后時(shí)間（t_D）的差異建立梯度表］，可以有效消除管路及儀器裝置差異對(duì)梯度的影響，使梯度方法有良好的分離重現(xiàn)性。