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不同的色譜柱的清洗方法有什么不同?

更新時(shí)間:2023-01-16 點(diǎn)擊次數(shù):1347
  高效液相色譜柱是消耗品,會(huì)隨使用時(shí)間或進(jìn)樣的次數(shù)增加,出現(xiàn)色譜峰高降低,峰寬加大或出現(xiàn)肩峰,柱效下降。需要定期進(jìn)行清洗和再生,不同的色譜柱清洗方法各不相同比如:
 
  1 反相柱 分別用甲醇:水=90:10,純甲醇(HPLC級(jí)),異丙醇(HPLC級(jí)),二氯甲烷(HPLC級(jí))等溶劑作為流動(dòng)相,依次沖洗,每種流動(dòng)相流經(jīng)色譜柱不少于20倍的色譜柱體積.然后再以相反的次序沖洗。
 
  2 正相柱 分別用正己烷(HPLC級(jí)),異丙醇(HPLC級(jí)),二氯甲烷(HPLC級(jí)),甲醇(HPLC級(jí))等溶劑做流動(dòng)相,順次沖洗,每種流動(dòng)相流經(jīng)色譜柱不少于20倍的柱體積(異丙醇粘度大,可降低流速,避免壓力過高).注意使用溶劑的次序不要顛倒,用甲醇沖洗完后,再以相反的次序沖洗至正己烷,所有的流動(dòng)相必須嚴(yán)格脫水。
 
  3 離子交換柱 長(zhǎng)時(shí)間在緩沖溶液中使用和進(jìn)樣,將導(dǎo)致色譜柱離子交換能力下降,用稀酸緩沖溶液沖洗可以使陽離子柱再生,反之,用稀堿緩沖溶液沖洗可以使陰離子柱再生。
 
  另外,還可以選擇能溶解柱內(nèi)污染物的溶劑為流動(dòng)相做正方向和反方向沖洗。但再生后的色譜柱柱效是不可能恢復(fù)到新柱的水平的.如果柱子裝反了,可以調(diào)回來,但可能會(huì)造成柱內(nèi)擔(dān)體塌陷.在不得已的情況下盡量不要反裝色譜柱。

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